上海易佰聚经贸有限公司

蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用赛多利斯的Vivaspin 和Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号 的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用，使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结的使用方 法和注意事项。
  1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，常见的是Ultra-15（10kD）。到底选择多大截留分子量比较合适呢？10kDa、 5kDa、还是30kDa？通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同，表格中有。
  2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。
  3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速 rpm换算成g之后，有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开 离心机，否则离心机出问题时，无法时间处理，后果不可预测！膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速 开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。
  4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用5mgml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为 止。
  5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再 浓缩至1ml左右，连续三次，一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍 左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。
  6、取出终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸取 浓缩液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的一点浓缩液不必吸取，否则难度太大，有可能损坏超滤膜。加入MilliQ水到超滤管中，没过 超滤膜，防止膜失水变干。
  7、以下是处理超滤管，重复利用超滤管的步骤。
  8、倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用枪头吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液，将 管芯浸入MilliQ水的烧杯（1或2L）中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时，不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗，内壁再用 MilliQ水洗干净。
  9、取出浸没的管芯，加至接近满的MilliQ水，50ml管也加满MilliQ水，将管芯慢慢放入50ml离心管，排出部分水，然后盖上盖子，放4度保存，直到下次使用。一般来说，按照上述步骤和注意事项，每根管用三四年不会坏。
 

赛多利斯提供三种材质的超滤膜可供客户选择：

聚醚砜（PES）膜：常规超滤膜，具有亲水性，高流速的特点。尤其适合回收大分子截留物；

三醋酸纤维素（CTA）膜：亲水性强，非特异性吸附极低，适合需要回收滤过液的操作；

Hydrosart®：具有极低蛋白吸附性的同时，又具有高流速的特点，是免疫球蛋白浓缩和脱盐的理想选择。

订购信息：

截留分子量	Vivaspin® 500	Vivaspin® 2	Vivaspin® 6	Vivaspin® 20
3,000MWCO	VS0192	VS0292	VS0692	VS2092
5,000MWCO	VS0112	VS0212	VS0612	VS2012
10,000MWCO	VS0102	VS0202	VS0602	VS2002
30,000MWCO	VS0122	VS0222	VS0622	VS2022
50,000MWCO	VS0132	VS0232	VS0632	VS2032
100,000MWCO	VS0142	——	VS0642	VS2042
报价/个	￥45	￥50	￥60	￥105

二、Vivacon®系列---- DNA、蛋白样品的浓缩和脱盐

特点：

---适合DNA和蛋白样品浓缩及更换缓冲液，非常适合稀释的样品

---水平模设计，配有再生纤维素超滤膜Hydrosart®

---样品处理后，可反转离心，保证完全浓缩回收

截留分子量MWCO	2,000	10,000	30,000	50,000	100,000	报价
Vivacon®500	VN01H92	VN01H02	VN01H22	VN01H32	VN01H42	￥50
Vivacon®2	VN02H92	VN02H02	VN02H22	VN02H32	VN02H42	￥70

特点：

---超滤速度快，操作简单，价格经济

    ---全透明外壳，可随时观察到溶液超滤情况，残留体积及滤膜状况

    ---接头可连接多块超滤器，增加处理量，容易规模放大

Vivaflow 50性能

---处理量从100ml到5L甚至更大

---单个滤器有效膜面积50 cm²

---将500ml样品浓缩至15ml以下，只需不到50min.

---循环体积小于10ml，样品可达到限度浓缩

---残留体积小于500ul

---抛弃型滤器

Vivaflow 200性能

---处理量从0.5L到5L甚至更大

------单个滤器有效膜面积200 cm²

---将250ml样品浓缩至20ml以下，只需数分钟，将1L样品浓缩50倍，只需30分钟，两个超滤器并联使用可以在75分钟内浓缩5L样品

---循环体积小于20ml，样品可达到限度浓缩

---残留体积小于2ml

---可重复使用

订购信息

产品编号	产品名称		MWCO	规格/盒		报价
VF05P0	Vivaflow 50		10,000	2		￥1320
VF05P4	Vivaflow 50		100,000	2		￥1320
VF20P0	Vivaflow 200		10,000	1		￥3405
VF20P4	Vivaflow 200		100,000	1		￥3405
Vivaflow超滤器配套蠕动泵系统（包括泵、易装载泵头和泵管）
型号		产品编号			报价
Vivaflow 50/200		VFS502			￥13890

注：以上货号为PES膜，另Vivaflow 200有RC膜和Hydrosart®膜产品，Vivaflow 50有RC膜产品，欢迎垂询！